RIP-seq細(xì)胞樣品送樣標(biāo)準(zhǔn)（版本：2025年10月）
RIP-seq細(xì)胞樣品送樣標(biāo)準(zhǔn)
細(xì)胞總量:
1x10^7次方個培養(yǎng)的細(xì)胞
細(xì)胞收樣方式:
一、 凍存液梯度降溫后寄送
貼壁細(xì)胞
1）從培養(yǎng)箱中取出貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，顯微鏡下觀察細(xì)胞，確定生長狀態(tài)良好且無污染；
2） 棄去培養(yǎng)基，向細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中加入5 ml 預(yù)冷的PBS，洗2次；
3）棄盡PBS，加入適量胰酶，放回37℃培養(yǎng)箱中消化，利用完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)；
4） 按照 5*10^6次方-10^7次方細(xì)胞每管進(jìn)行分裝，準(zhǔn)確標(biāo)記后將分裝好的細(xì)胞 4°C、500 g 離心 5 分鐘；
5） 吸去全部液體，加入 500 μl冷 PBS 洗滌，4°C、500 g 離心 5 分鐘；
6） 吸去全部液體，加入1mL 預(yù)冷的細(xì)胞凍存液，輕輕吹打細(xì)胞沉淀混勻，梯度降溫凍存（凍存常用方法：4℃ 30 min-1h→ -20℃ 30 min-2h→ -80℃ 16～18 h（過夜）→液氮）；
7）液氮速凍，-80℃保存。
注意：活率85%以上，避免支原體和微生物污染；建議送2份，一份備份。
懸浮細(xì)胞
1） 確定細(xì)胞生長狀態(tài)良好且無污染；
2） 按照5*10^6次方-10^7次方細(xì)胞每管進(jìn)行分裝，準(zhǔn)確標(biāo)記后將分裝好的細(xì)胞 4°C、500 g 離心 5 分鐘；
3） 吸去全部液體，加入500 μl冷 PBS 洗滌，4°C、500 g 離心 5 分鐘；
4） 吸去全部液體，加入1mL 預(yù)冷的細(xì)胞凍存液，輕輕吹打細(xì)胞沉淀混勻，梯度降溫凍存（凍存常用方法：4℃ 30 min-1h→ -20℃ 30 min-2h→ -80℃ 16～18 h（過夜）→液氮）；
5）液氮速凍，-80℃保存。
注意：活率85%以上，避免支原體和微生物污染；建議送2份，一份備份。
二、細(xì)胞沉淀
貼壁細(xì)胞
① 去培養(yǎng)液，預(yù)冷PBS洗3次，吸凈；
② 加少量冷PBS，刮刀刮下或用胰酶消化，終止消化后移入15 mL管，4 °C 1 000 g × 5 min；
③ 棄上清，冷PBS 1 mL重懸，轉(zhuǎn)入1.5 mL管，同速離心；
④ 去盡液體，液氮速凍，-80 °C保存。
懸浮細(xì)胞
① 4 °C 1 000 g × 5 min收菌，棄上清；
② 冷PBS洗3次，吸凈；
③ 1 mL冷PBS重懸，轉(zhuǎn)入1.5 mL管，再次離心；
④ 去盡殘液，液氮速凍，-80 °C保存。
