血液樣本采集說明
血液樣本采集說明（版本：2022年9月）
A、血液樣本采集說明
1、用于提取RNA 的全血保存方法及運(yùn)輸要求
全血 mRNA 中含有高豐富度的 globin mRNA 轉(zhuǎn)錄本。這些轉(zhuǎn)錄本可以占到全部 mRNA 組分中的 50-80%。這些轉(zhuǎn)錄本序列保守，研究價值極為有限，因此其存在會造成數(shù)據(jù)浪費(fèi)， 并顯著降低對其他低豐富度轉(zhuǎn)錄本的靈敏性。由于 globin mRNA 主要來自成熟紅細(xì)胞，因此我們建議全血提取時先分離有核細(xì)胞后，再提取總 RNA。
分離白細(xì)胞或者有核細(xì)胞方法（須在血液采集后半小時內(nèi)進(jìn)行，血液不能凍存） 亦可用實驗室自有辦法進(jìn)行白細(xì)胞分離
a) 在已加入抗凝劑（推薦 EDTA，禁止使用肝素）的新鮮全血中加入等體積 PBS（1×），
溫柔的顛倒混勻數(shù)次，不要劇烈震蕩；
b) 緩慢轉(zhuǎn)入另一已加入淋巴細(xì)胞分離液的離心管中，并使上述混合液處于淋巴細(xì)胞分離液液面之上（即兩種液體不要混合，保留清晰的接口），3000g 離心 30min；
c) 用移液器小心分離出白細(xì)胞層：用PBS（1×）清洗白細(xì)胞，離心回收白細(xì)胞，棄去上清；
d) 按 2ul 血液分離的白細(xì)胞加入 1ul TRIzol 的比例加入適量 TRIzol 試劑，用吸頭將細(xì)胞團(tuán)吹打散，或者劇烈震蕩混勻，使細(xì)胞完全溶于 TRIzol 中充分裂解；
轉(zhuǎn)移至-80℃低溫保存，送樣時選擇干冰寄送
如若實驗室實在沒有辦法進(jìn)行白細(xì)胞分離，亦可寄送全血樣品，要求如下：
收集全血，每 250ul 的全血樣品加入 750ul 的 Trizol LS（Ambion），充分混勻，每個樣品處理 2-4 管，-80℃保存，干冰寄送。
2、用于提取 DNA 的全血保存方法及運(yùn)輸要求
DNA 提取樣品同樣推薦預(yù)先進(jìn)行白細(xì)胞分離，分離后的白細(xì)胞-80℃保存，干冰寄送，2ul 全血分離的白細(xì)胞基本可以滿足實驗要求。
若實驗條件不能滿足白細(xì)胞分離，采血后的全血可分裝在凍存管，-80℃保存，干冰寄送全血樣品進(jìn)行 DNA 提取。
